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外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法有何區(qū)別?

  內(nèi)標(biāo)法是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定。

  選擇適宜的物質(zhì)作為預(yù)測(cè)組分的參比物,定量加到樣品中去,依據(jù)欲測(cè)定組分和參比物在檢測(cè)器上的響應(yīng)值(峰面積或峰高)之比和參比物加入量進(jìn)行定量分析的方法叫內(nèi)標(biāo)法。特點(diǎn)是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和未知樣品同時(shí)進(jìn)樣,一次進(jìn)樣。

  在用內(nèi)標(biāo)法做色譜定量分析時(shí),先配制一定重量比的被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析,測(cè)量峰面積,做重量比和面積比的關(guān)系曲線,此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際樣品分析時(shí)所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所用的條件一致,因此,在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、 載氣流速等),還應(yīng)注明進(jìn)樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度。在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),各點(diǎn)并不完全落在直線上,此時(shí)應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差,在使用過(guò)程中應(yīng)定期進(jìn)行單點(diǎn)校正,若所得值與平均值的偏差小于2,曲線仍可使用,若大于2,則應(yīng)重作曲線,如果曲線在鉸短時(shí)期內(nèi)即產(chǎn)生變動(dòng),則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量。

  外標(biāo)法要求儀器重復(fù)性很嚴(yán)格,適于大量的分析樣品,因?yàn)閮x器隨著使用會(huì)有所變化,因此需要定期進(jìn)行曲線校正。用待測(cè)組分的純品作對(duì)照物質(zhì),以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法稱為外標(biāo)法。此法可分為工作曲線法及外標(biāo)一點(diǎn)法等。工作曲線法是用對(duì)照物質(zhì)配制一系列濃度的對(duì)照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,準(zhǔn)確進(jìn)樣與對(duì)照品溶液相同體積的樣品溶液, 根據(jù)待測(cè)組分的信號(hào),從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度,或用回歸方程計(jì)算,工作曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。通常截距應(yīng)為零,若不等于零說(shuō)明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時(shí),可用外標(biāo)一點(diǎn)法(直接比較法)定量。

外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法有何區(qū)別?

  內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要精確控制進(jìn)樣量,由進(jìn)樣量不同造成的誤差不會(huì)帶到結(jié)果中。缺陷在于內(nèi)標(biāo)物很難尋找,而且分析操作前需要較多的處理過(guò)程,操作復(fù)雜,并可能帶來(lái)誤差。一個(gè)合適的內(nèi)標(biāo)物應(yīng)該滿足以下要求:能夠和待測(cè)樣品互溶;出峰位置不和樣品中的組分重疊;易于做到加入濃度與待測(cè)組分濃度接近;譜圖上內(nèi)標(biāo)物的峰和待測(cè)組分的峰接近。

  選擇內(nèi)標(biāo)物有幾個(gè)要求:1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì);2.它必須完全溶于試樣中,并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離; 3.加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測(cè)組分;4.色譜峰的位置應(yīng)與被測(cè)組分的色譜峰的位置相近,或在幾個(gè)被測(cè)組分色譜峰中間。

  而外標(biāo)法簡(jiǎn)便,但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確,要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行,否則造成分析誤差,得不到準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果。

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