代謝組學(xué)服務(wù)
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代謝組學(xué)知識問答(Q&A) |
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2.與基因組,轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)相比,代謝組學(xué)有什么優(yōu)勢? 1)基因和蛋白表達(dá)的微小變化會在代謝物上得到放大,從而使檢測更容易; 2)小分子的產(chǎn)生和代謝是生物機(jī)體作用的最終結(jié)果,生物體液的代謝產(chǎn)物分析能夠更直接,更準(zhǔn)確的反映生物體的病理生理狀態(tài) 3)代謝組學(xué)的研究不需建立全基因組測序及大量表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)的數(shù)據(jù)庫; 4)代謝物的種類要遠(yuǎn)小于基因和蛋白的數(shù)目,物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)簡單很多(每個組織中大約為103數(shù)量級,而最小的細(xì)菌基因組中也有幾千個基因; 5)代謝產(chǎn)物在各個生物體系中都是類似的,所以代謝組學(xué)研究中采用的技術(shù)更容易在各個領(lǐng)域中應(yīng)用。
3.代謝組學(xué)檢測的手段有哪些? 目前主要技術(shù)手段是核磁共振(NMR ),液-質(zhì)聯(lián)用(GC-TOF-MS),氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS),等。通過檢測一系列樣品的譜圖,再結(jié)合化學(xué)模式識別方法,可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài),基因的功能,藥物的毒性和藥效等,并有可能找出與之相關(guān)的生物標(biāo)志物(biomarker)。
4. 代謝組學(xué)可以檢測哪些樣品,應(yīng)該怎么選擇研究的樣本類型? 代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。其樣品主要是血清、血漿、尿液、糞便、細(xì)胞、細(xì)菌、組織、培養(yǎng)液等。實驗研究樣本類型,取決于課題的研究目的和檢測目標(biāo)。血、唾液、尿、糞便等生物樣品無創(chuàng)或微創(chuàng)方式的采集方式便于臨床轉(zhuǎn)化和推廣,常用于臨床診斷的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)和驗證,探索和解釋疾病的病理機(jī)制研究常選用組織和細(xì)胞樣品。
5. 做代謝組學(xué)的樣本應(yīng)如何處理? 代謝研究的樣本處理和采集要遵循“保持最鮮活狀態(tài)”的原則,樣本采集后立置于液氮、干冰或者-80°C冰箱中保存,深低溫使酶失活,細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)停止,阻止樣本離體后的進(jìn)一步代謝活動,效果穩(wěn)定。具體樣品的收集方法可咨詢?nèi)A盈生物技術(shù)支持。 6. 檢測菌群相關(guān)代謝物,應(yīng)該選擇什么類型的樣品,怎么收集? 糞便是腸道菌群和宿主互作的終端,具有無創(chuàng)、易于獲得特點,常被選擇用于菌群相關(guān)代謝物的檢測。大鼠直接取2-3粒;小鼠糞便小,需要收集≥5粒,將待取樣的小鼠放進(jìn)干凈的鋪有消毒濾紙的籠子里,小鼠排便后立即收集糞便樣本。不同的小鼠取樣要更換新的濾紙;小鼠糞便采用滅菌離心管,分裝好后立即放入-80℃保存;人的糞便樣品收集需注意:糞便樣本存在異質(zhì)性,新鮮糞便凍存之前,用無菌棒將樣品混勻。
7. 代謝組學(xué)研究怎么設(shè)置生物學(xué)重復(fù)? 代謝物處于生命活動的下游,其動態(tài)波動性相較于基因和蛋白較大,需要生物學(xué)重復(fù)來增加數(shù)據(jù)的可靠性和說服力。對于臨床樣品:30-50例/組,模式動物:10-20例/組,細(xì)胞樣本:4-6例/組,微生物:8-15例/組。樣本重復(fù)數(shù)量最好大于6個,樣本數(shù)量過少,后續(xù)多元統(tǒng)計分析模型容易過擬合,統(tǒng)計結(jié)果不可靠,會受到質(zhì)疑。每組樣本的生物學(xué)重復(fù)的個數(shù)最好相差不要太多,差別不要超過2/3。
8. 同一個實驗的樣品可不可以分成兩批檢測? 建議最好不要分成兩批檢測,因為這不同時間點儀器的響應(yīng)可能會發(fā)生變化,一些含量低的物質(zhì)可能只在一個批次里被檢出,導(dǎo)致最終的結(jié)果不可靠,因此我們應(yīng)當(dāng)盡可能的減少人為因素以及儀器對實驗結(jié)果的影響。
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