植物產(chǎn)生的主要激素有細(xì)胞分裂素(CK)、水楊酸(SA)、茉莉酸(JA)、脫落酸(ABA)、生長(zhǎng)素(IAA)、赤霉素(GA)、乙烯(ET)等。細(xì)胞分裂素在促進(jìn)植物細(xì)胞擴(kuò)展、分化、增殖等方面發(fā)揮著生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用;生長(zhǎng)素在植物發(fā)展過程中都發(fā)揮著重要作用;水楊酸茉莉酸可以參與植物根的發(fā)育,還可抑制病原物在植物體內(nèi)的增殖從而增強(qiáng)抗病性。
植物內(nèi)源激素是植物體內(nèi)的一種微量有機(jī)物質(zhì),可調(diào)節(jié)植物從胚胎發(fā)育、器官生成、生物防御、脅迫耐受到生殖發(fā)育等各個(gè)方面的活動(dòng)。植物內(nèi)源激素在植物各器官中呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)分布,性質(zhì)不穩(wěn)定,且含量極少,因此其測(cè)定方法既要精確又要靈敏。通常先選用合適的有機(jī)溶劑對(duì)其進(jìn)行提取,然后采用萃取或?qū)游龅玫讲糠謨艋?,再測(cè)定其含量。
目前,植物內(nèi)源激素的測(cè)定方法主要包括生物測(cè)定法、氣相色譜法、超高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等幾種檢測(cè)方法。其中,超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS)由于其具有分辨率高、檢出限低、高效靈敏等優(yōu)點(diǎn),目前已成為植物激素最重要的分析方法。我們通過對(duì)葉菜類植物樣品前處理方法、色譜質(zhì)譜條件等方面摸索優(yōu)化,現(xiàn)有操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的較成熟方法,UPLC-MS同時(shí)測(cè)定植物組織中SA、JA、IAA、ABA等17種植物內(nèi)源激素的含量。
實(shí)驗(yàn)方法的優(yōu)化,首先對(duì)前處理?xiàng)l件的對(duì)比,不同的提取方式(超聲和震蕩),提取時(shí)間長(zhǎng)短。有研究顯示,植物內(nèi)源激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)差異較大,且周圍共存的基體成分也比較復(fù)雜,對(duì)溫度等外界條件敏感,在各器官中呈現(xiàn)一定的動(dòng)態(tài)分布。因此在該試驗(yàn)過程中,前處理提取方式及外界試驗(yàn)環(huán)境對(duì)試驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。影響較大的因素主要包括光環(huán)境、是否充分提取等。在固相萃取的整個(gè)過程中,流速的控制以及洗脫的速度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響均極大。