色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類， 尺寸規(guī)格也不同： ①常規(guī)分析柱(常量柱)，內(nèi)徑 2~5mm(常用 4.6mm)， 柱長 10~30cm; ②窄徑柱(narrow bore，又稱細(xì)管徑柱、 半微柱 semi-microcolumn)， 內(nèi)徑 1~2mm， 柱長 10~20cm; ③毛細(xì)管柱(又稱微柱 microcolumn)， 內(nèi)徑 0.2~0.5mm; ④半制備柱， 內(nèi)徑>5mm; ⑤實驗室制備柱， 內(nèi)徑 20~40mm， 柱長 10~30cm; ⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。

　　常見的分配柱填料： 碳十八柱 (ODS/C18)、 碳八柱(MOS/C8)、 碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、 碳一柱(Methyl/C1)、 陰離子交換柱(SAX)、陽離子交換柱(SCX)、 苯基柱(Phenyl)、 氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)

　　常見的吸附柱填料： 硅膠柱

色譜柱的安裝

　　1、 首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積、進(jìn)樣閥、 柱子、檢測器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線，同時控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前，確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。

　　2、 為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)最佳的連接效果，應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。

　　3、 使用 PEEK 材料的通用接頭，只需用手?jǐn)Q緊不需要特定扳手，使用壓力為 5000psi；使用溫度不得超過 80℃。

流動相的選擇

　　1、 在進(jìn)行樣品檢測前， 至少使用 20 倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。 流動相一定要使用色譜級別的溶劑。 如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生。

　　2、 流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動相沖洗 C18 色譜柱， 以免柱性能損壞。添加 5%-10%的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，同時可以達(dá)到對緩沖鹽清洗的作用，還可以使色譜柱更容易平衡。

　　3、 流動相需脫氣后使用， 可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。 如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別， 應(yīng)該使用過度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。 正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

樣品制備

　　1、 樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。

　　2、 樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過濾器對樣品預(yù)先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。

　　3、 色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得最佳分離效果，使用時請不要超過 200kgf， 而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外最高操作溫度不要超過 60℃。

保存操作

　　1、 如果流動相含有酸或無機(jī)鹽， 應(yīng)當(dāng)先用去離子水(20 倍柱體積) 沖洗干凈。 然后用用 100%乙腈或甲醇保存色譜柱。 最后用柱子的接頭密封， 并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。

　　2、 應(yīng)避免色譜柱受到直接的機(jī)械沖擊或摔落， 避免造成色譜柱性能的降低。

色譜柱的再生：

　　用相當(dāng)于 20 倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子， 建議按柱子的箭頭方向沖洗， 盡可能不反沖。沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇。

注意事項

　　色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中， 需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

　?、?避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。 溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況; 柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料， 因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行， 在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

　　② 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成， 特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>

　?、?一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

　?、?選擇使用適宜的流動相(尤其是 pH)，以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時， 預(yù)柱為硅膠， 可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　?、?避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)， 需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

　?、?經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱， 清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。 在進(jìn)行清洗時， 對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的 20 倍左右，即常規(guī)分析需要 50~75ml。